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<br><br>
<div align="center"><font size=5><b>Lunes 26 de mayo de 2008 - 13
hs<br><br>
</b>Aula de Seminarios del INQUIMAE, 3er piso Pab. II <br><br>
<br>
</font><font size=6><b>Dr. Mariano Bossi<br><br>
<br>
Microscopias avanzadas de fluorescencia de campo lejano con resolucion
biomolecular<br><br>
<br>
</b></font></div>
Resumen:<br>
<font face="Arial, Helvetica" size=4>La microscopía de fluorescencia de
campo lejano es una de las herramientas más utilizadas en las “ciencias
vivas”, entre otras, debido a su alta especificidad, sensibilidad y
carácter no invasivo. La resolución obtenible es </font>˜
<font face="Arial, Helvetica" size=4>200 nm en el plano focal, limitada
por la difracción. Muchos fenómenos de gran importancia ocurren a escala
(bio)molecular (</font>˜ <font face="Arial, Helvetica" size=4>10-50 nm),
y por ende son indetectables en microscopios convencionales.
Recientemente, nuevas técnicas de microscopía permitieron sobrepasar la
“barrera de la difracción” utilizando dos estados<br>
moleculares de una sonda fluorescente no sólo para generar la señal, sino
para mejorar la
resolución</font><font face="Arial, Helvetica" size=1>[1]</font>
<font face="Arial, Helvetica" size=4>. Una de las formas posibles de
utilizar estos estados se basa en la saturación de dicha transición,
dando origen a la familia de microscopías RESOLFT (reversible saturable
optical fluorescence
transitions)</font><font face="Arial, Helvetica" size=1>[2]</font>
<font face="Arial, Helvetica" size=4>. Una nueva familia de técnicas
también utiliza los estados moleculares de la sonda pero de manera
distinta</font><font face="Arial, Helvetica" size=1>[3,
4]</font><font face="Arial, Helvetica" size=4>. El concepto se basa en
foto-activar y localizar un número elevado de moléculas simples (MS) para
reconstruir la imagen del objeto<br>
en observación haciendo un mapeo de la posición de las sondas
localizadas. La posición de estas moléculas puede ser determinada con una
precisión por debajo del límite de difracción. <br>
En el presente seminario se presentarán los avances realizados en ambos
tipos de microscopías de alta resolución, utilizando compuestos
fotocrómicos biestables o de largo tiempo de vida del estado no emisor.
En primer lugar se discutirá la aplicación de este tipo de compuestos en
microscopías RESOLFT, permitiendo utilizar bajas intensidades de
luz</font><font face="Arial, Helvetica" size=1>[5]</font>
<font face="Arial, Helvetica" size=4>. Posteriormente se presentará la
utilización de una nueva familia de sondas fotocrómicas y fluorescentes
(Esquema 1)</font><font face="Arial, Helvetica" size=1>[6, 7]
</font><font face="Arial, Helvetica" size=4>en microscopías de
localización de MS, que permtió incrementar el número de fotones
detectados (mejor resolución), realizar un proceso más efectivo de
colección de imágenes (reducción del tiempo de adquisición) y reducir la
señal de </font><font face="Times New Roman, Times" size=4><i>background
</i></font><font face="Arial, Helvetica" size=4>(eliminando la necesidad
de utilizar estabilizaciones mecánicas). Además, mediante la activación
de amidas de rodaminas por absorción de dos fotones, se logró alcanzar
resolución axial (seccionado y reconstrucción 3D de imágenes). Esto
representa un avance considerable en comparación con la activación por un
fotón que posee una prácticamente nula resolución axial (Figura 1). Se
presentarán además aplicaciones de este tipo de microscopía utilizando
varias sondas (imágenes multicolores), que confieren una mayor
especificidad y permiten la realización de experimentos de colocalización
de estructuras o biomoléculas.<br>
<img src="cid:7.1.0.9.0.20080521154316.03507550@qi.fcen.uba.ar.0" width=345 height=294 alt="Emacs!">
<img src="cid:7.1.0.9.0.20080521154316.03507550@qi.fcen.uba.ar.1" width=512 height=301 alt="Emacs!">
<br>
</font><font face="Arial, Helvetica">[1] S. W. Hell,
</font><font face="Times New Roman, Times"><i>Science
</i><b>2007</b></font><font face="Arial, Helvetica">,
</font><font face="Times New Roman, Times"><i>316</i></font>
<font face="Arial, Helvetica">, 1153-1158.<br>
[2] S. W. Hell, K. I. Willig, M. Dyba, S. Jakobs, L. Kastrup, V.
Westphal, in </font><font face="Times New Roman, Times"><i>Handbook of
Biological Confocal Microscopy
</i></font><font face="Arial, Helvetica">(Ed.: J.<br>
Pawley), Springer, New York,
</font><font face="Times New Roman, Times"><b>2006</b></font>
<font face="Arial, Helvetica">, pp. 571-579.<br>
[3] E. Betzig, G. H. Patterson, R. Sougrat, O. W. Lindwasser, S. Olenych,
J. S. Bonifacino, M. W. Davidson, J. Lippincott-<br>
Schwartz, H. F. Hess,
</font><font face="Times New Roman, Times"><i>Science
</i><b>2006</b></font><font face="Arial, Helvetica">,
</font><font face="Times New Roman, Times"><i>313</i></font>
<font face="Arial, Helvetica">, 1642-1645.<br>
[4] M. J. Rust, M. Bates, X. Zhuang,
</font><font face="Times New Roman, Times"><i>Nature Methods
</i><b>2006</b></font><font face="Arial, Helvetica">,
</font><font face="Times New Roman, Times"><i>3</i></font>
<font face="Arial, Helvetica">, 793-796.<br>
[5] M. Bossi, J. Fölling, M. Dyba, V. Westphal, S. W. Hell,
</font><font face="Times New Roman, Times"><i>New J. Phys.
</i><b>2006</b></font><font face="Arial, Helvetica">,
</font><font face="Times New Roman, Times"><i>8</i></font>
<font face="Arial, Helvetica">, 275.<br>
[6] J. Fölling, V. Belov, R. Kunetsky, R. Medda, A. Schönle, A. Egner, C.
Eggeling, M. Bossi, S. W. Hell,
</font><font face="Times New Roman, Times"><i>Angew. Chem. Int. Ed.<br>
</i><b>2007</b></font><font face="Arial, Helvetica">,
</font><font face="Times New Roman, Times"><i>46</i></font>
<font face="Arial, Helvetica">, 6266-6270.<br>
[7] J. Fölling, V. Belov, D. Riedel, A. Schönle, A. Egner, C. Eggeling,
M. Bossi, S. W. Hell
</font><font face="Times New Roman, Times"><i>ChemPhysChem
</i><b>2008</b></font><font face="Arial, Helvetica">,
</font><font face="Times New Roman, Times"><i>9</i></font>
<font face="Arial, Helvetica">, 321 - 326.<br>
</font></body>
</html>