<html>
<body>
<br><br>
<div align="center"><font size=5><b>Lunes 26 de mayo de 2008 - 13
hs<br><br>
</b>Aula de Seminarios del INQUIMAE, 3er piso Pab. II <br><br>
<br>
</font><font size=6><b>Dr. Mariano Bossi<br><br>
<br>
Microscopias avanzadas de fluorescencia de campo lejano con resolucion
biomolecular<br><br>
<br>
</b></font></div>
Resumen:<br>
<font size=4>La microscopía de fluorescencia de campo lejano es una de
las herramientas más utilizadas en las “ciencias vivas”, entre otras,
debido a su alta especificidad, sensibilidad y carácter no invasivo. La
resolución obtenible es </font>˜ <font size=4>200 nm en el plano focal,
limitada por la difracción. Muchos fenómenos de gran importancia ocurren
a escala (bio)molecular (</font>˜ <font size=4>10-50 nm), y por ende son
indetectables en microscopios convencionales. Recientemente, nuevas
técnicas de microscopía permitieron sobrepasar la “barrera de la
difracción” utilizando dos estados<br>
moleculares de una sonda fluorescente no sólo para generar la señal, sino
para mejorar la resolución</font><font size=1>[1]</font><font size=4>.
Una de las formas posibles de utilizar estos estados se basa en la
saturación de dicha transición, dando origen a la familia de microscopías
RESOLFT (reversible saturable optical fluorescence
transitions)</font><font size=1>[2]</font><font size=4>. Una nueva
familia de técnicas también utiliza los estados moleculares de la sonda
pero de manera distinta</font><font size=1>[3, 4]</font><font size=4>. El
concepto se basa en foto-activar y localizar un número elevado de
moléculas simples (MS) para reconstruir la imagen del objeto<br>
en observación haciendo un mapeo de la posición de las sondas
localizadas. La posición de estas moléculas puede ser determinada con una
precisión por debajo del límite de difracción. <br>
En el presente seminario se presentarán los avances realizados en ambos
tipos de microscopías de alta resolución, utilizando compuestos
fotocrómicos biestables o de largo tiempo de vida del estado no emisor.
En primer lugar se discutirá la aplicación de este tipo de compuestos en
microscopías RESOLFT, permitiendo utilizar bajas intensidades de
luz</font><font size=1>[5]</font><font size=4>. Posteriormente se
presentará la utilización de una nueva familia de sondas fotocrómicas y
fluorescentes (Esquema 1)</font><font size=1>[6, 7]
</font><font size=4>en microscopías de localización de MS, que permtió
incrementar el número de fotones detectados (mejor resolución), realizar
un proceso más efectivo de colección de imágenes (reducción del tiempo de
adquisición) y reducir la señal de
</font><font face="Times New Roman, Times" size=4><i>background
</i></font>(eliminando la necesidad de utilizar estabilizaciones
mecánicas). Además, mediante la activación de amidas de rodaminas por
absorción de dos fotones, se logró alcanzar resolución axial (seccionado
y reconstrucción 3D de imágenes). Esto representa un avance considerable
en comparación con la activación por un fotón que posee una prácticamente
nula resolución axial (Figura 1). Se presentarán además aplicaciones de
este tipo de microscopía utilizando varias sondas (imágenes
multicolores), que confieren una mayor especificidad y permiten la
realización de experimentos de colocalización de estructuras o
biomoléculas.<br>
<img src="cid:7.1.0.9.0.20080521161151.034fcd88@qi.fcen.uba.ar.2" width=345 height=294 alt="Emacs!">
<img src="cid:7.1.0.9.0.20080521161151.034fcd88@qi.fcen.uba.ar.3" width=512 height=301 alt="Emacs!">
<br>
[1] S. W. Hell, <font face="Times New Roman, Times"><i>Science
</i><b>2007</b></font>,
<font face="Times New Roman, Times"><i>316</i></font>, 1153-1158.<br>
[2] S. W. Hell, K. I. Willig, M. Dyba, S. Jakobs, L. Kastrup, V.
Westphal, in <font face="Times New Roman, Times"><i>Handbook of
Biological Confocal Microscopy </i></font>(Ed.: J.<br>
Pawley), Springer, New York,
<font face="Times New Roman, Times"><b>2006</b></font>, pp. 571-579.<br>
[3] E. Betzig, G. H. Patterson, R. Sougrat, O. W. Lindwasser, S. Olenych,
J. S. Bonifacino, M. W. Davidson, J. Lippincott-<br>
Schwartz, H. F. Hess, <font face="Times New Roman, Times"><i>Science
</i><b>2006</b></font>,
<font face="Times New Roman, Times"><i>313</i></font>, 1642-1645.<br>
[4] M. J. Rust, M. Bates, X. Zhuang,
<font face="Times New Roman, Times"><i>Nature Methods
</i><b>2006</b></font>,
<font face="Times New Roman, Times"><i>3</i></font>, 793-796.<br>
[5] M. Bossi, J. Fölling, M. Dyba, V. Westphal, S. W. Hell,
<font face="Times New Roman, Times"><i>New J. Phys.
</i><b>2006</b></font>,
<font face="Times New Roman, Times"><i>8</i></font>, 275.<br>
[6] J. Fölling, V. Belov, R. Kunetsky, R. Medda, A. Schönle, A. Egner, C.
Eggeling, M. Bossi, S. W. Hell,
<font face="Times New Roman, Times"><i>Angew. Chem. Int. Ed.<br>
</i><b>2007</b></font>,
<font face="Times New Roman, Times"><i>46</i></font>, 6266-6270.<br>
[7] J. Fölling, V. Belov, D. Riedel, A. Schönle, A. Egner, C. Eggeling,
M. Bossi, S. W. Hell <font face="Times New Roman, Times"><i>ChemPhysChem
</i><b>2008</b></font>,
<font face="Times New Roman, Times"><i>9</i></font>, 321 - 326.<br>
</body>
</html>